Kļūstot par Schizophyllum komūnu: izveidojiet sterilu kultūru no atrastajām sēnēm: 3 soļi (ar attēliem)

2024 Autors: John Day | [email protected]. Pēdējoreiz modificēts: 2024-01-30 10:57

Šī pamācība ir vērsta uz to, lai izskaidrotu, kā izveidot sterilu sēņu Schizophyllum Commune kultūru (parastais nosaukums Split Gill sēne) uz Petri trauka, izmantojot atrastās sēnes. Ir konstatēts, ka Schizophyllum Commune ir vairāk nekā 28 000 dzimumu, to var atrast visos kontinentos, izņemot Antarktīdu, un tā spēj (tāpat kā citas "baltās un brūnās puves sēnītes") noārdīt endokrīno sistēmu traucējošo piesārņojumu (plastmasa, hormonus atdarinošas rūpnieciskās naftas ķīmijas vielas, piemēram, mēslojums Atrazine, plastifikators bisfenols-A vai sintētiskais hormons Diethylstilbestrol).

Es apskatīšu savvaļas sēņu identifikācijas paņēmienus, kā pagatavot barības vielu agara Petri trauku un kā izmantot atrastās sēnes, lai jūsu Petri traukā audzētu sterilu izolētu kultūru. Citas šīs sērijas pamācības ietver tādas metodes kā sēņu ģenētiskā identifikācija, vienkāršas fermentatīvas pārbaudes, lai pārbaudītu sēņu spēju sadalīt plastmasu un piesārņojumu, kas imitē hormonus, un kā pagatavot sieru ar S. Commune.

Šis projekts radās no Marijas Megikas, Paulas Pinas un manis kopīgā darba rezidences laikā HANGAR Barselonā, Spānijā, 2018. gada rudenī. Lai iegūtu vairāk informācijas par projektu, izlasiet ~ ~ vai izlaidiet visu Bla Bla un pārejiet tieši uz soli 1 apmācībai:)

Attēli ir no Schizophyllum Commune Fanzine ~ failus var lejupielādēt bez maksas šeit

Rezidences laikā mūsu trīs galvenie mērķi bija:

1 ~ Izpētiet un apkopojiet zinātnisko literatūru par Schizophyllum Commune un tās dažādajām mijiedarbībām ar hormoniem un endokrīno sistēmu iznīcinošajiem naftas ķīmijas piesārņotājiem. S. Commune ir viena no daudzajām "baltās un brūnās puves" sēnītēm ar spēju noārdīt hormonālo un endokrīno sistēmu traucējošo piesārņojumu. Šīs sēnes barojas no kokiem, izdalot "lignocelulozes" enzīmus no tīklotajiem ķermeņiem vai "micēliju", un fermenti spēj noārdīt celulozi un lignīnu, no kura izgatavoti koki. Celulozes, lignīna un EDS / hormonu, piemēram, atrazīna, BPA, estradiola, dietilstilbestrola un nonilfenolu, strukturālo līdzību dēļ sēnīšu izdalītie "lignocelulozes" fermenti var arī sadalīt dažādus toksiskus līdzekļus. Papildus tam S. Commune ražo imūnstimulējošus polisaharīdus, kas ir noderīgi kā vēža profilakse un ārstēšana (Japānā apstiprināts dzemdes kakla vēža ārstēšanai), fermentācijas ceļā var uzlabot dažu augu fitoestrogēnās īpašības, var izmantot fermenta un lactobacilius vietā. siera gatavošanas procesos un ražo trombīna recekļa šķīstošos enzīmus (noderīgi trombozes ārstēšanā). Dīvaini, bet tos pašus "beta-glikānus", kurus var iegūt ar verdošu ūdeni kā vēža ārstēšanu un imūnstimulējošus līdzekļus, izmanto arī naftas rūpniecība, lai palielinātu naftas ieguves apjomu, piesaistot S. Commune dīvainā atgriezeniskās saites ciklā endokrīnās sistēmas traucējumu ražošanai. naftas ķīmijas produktus, tas spēj noārdīties un attīrīt.

2 ~ Izstrādājiet DIY un DIWO (dariet to kopā ar citiem) protokolus, kas vienkāršo šos adresātus darbam ar EDC un sēnītēm, lai kodificētas zinātniskās zināšanas tulkotu pieejamākā valodā. Izmantojiet šos adresātus izglītībai, aptaujām, izturībai pret molekulāro kolonizāciju un jaunu stāstījumu veidošanai par daudzu sugu tapšanu un mūsu kolektīvo mutaģenēzi.

3 ~ Izaiciniet dominējošo cisheteronormative, queerphobic diskursu par endokrīnās sistēmas traucējumiem (EDC). Citējot Malina Aha-Kinga un Evas Heivoldas stipendiju par šiem jautājumiem: "Daudzi ziņu avoti ziņo par šīm biedējošajām endokrīnajām pasakām no mūsu pagalmiem. Cenšoties izvirzīt priekšplānā šos jautājumus-kā mēs aprakstīsim tālāk, plašsaziņas līdzekļi ir parādījuši Frankenšteinas metamorfozi. kas apdraud seksu un seksualitāti. Tā vietā, lai risinātu daudzus citus veselības riskus, kas saistīti ar toksisko iedarbību, sensacionālākie un polemiskākie jautājumi ir debates un kritiskas atbildes. Tas rada jautājumus: kāpēc sekss ir svarīgāks par vēzi, autoimūna slimība, un pat nāve? Kādi kultūras nervi (no kuriem daudzi ir globalizēti) tiek iedarbināti? Un tiem, kam ir feministiskas bažas, kā mēs pārorientējam debates no esenciālisma, seksisma un heteronormativitātes? " (Toksiskie dzimumi).

Schizophyllum Commune ir unikāla "baltās puves sēne", jo ir konstatēts, ka tai ir vairāk nekā 28 000 ģenētisko dzimumu. Šī pielāgošanās, ko daudzi teorē, ir ļāvusi šīs sugas neticamajai ģenētiskajai daudzveidībai, kas pastāv visos pasaules kontinentos, izņemot Antarktīdu. Mēs vēlējāmies svinēt šī organisma skaisto seksuālo daudzveidību kā vienu no bioloģijas dīvainības piemēriem. Dominējošais diskurss par EDC plašsaziņas līdzekļos un pat vides aktīvistu uzmanības centrā ir nezinātniski stāstījumi, ka šīs molekulas izraisa noteiktu seksualitāti vai dzimumu, ko mūsu sabiedrība patoloģizē, apzīmē ar normatīviem un bieži cenšas novērst vai izvairīties. Sabiedrības sašutums par EDC zinātniski nereālo (ne tikai hormoni un endokrīnās sistēmas traucējošie faktori nepadara cilvēkus dīvainus vai transus) ir ne tikai seksuāli panikā, dīvaini fobiski, bet arī ignorē visas postoši reālās sekas, kuras mēs varam saistīt ar EDC: aptaukošanās, vairogdziedzera darbības traucējumi, daži vēža veidi, kā arī citi veselības riski.

1. darbība. Atrodiet Schizophyllum Commune, kas dzīvo jūsu kopienā

Labas kvalitātes sterilās Schizophyllum Commune kultūras var iegādāties par aptuveni 350 USD mikrobioloģiskās kultūras bankā, piemēram, ATCC … tāpēc mēs izvēlējāmies kultivēšanu no savvaļas sēnēm bez maksas:)

Man bija viegli, jo biju lasījusi par Schizophyllum Commune un tikko pamanīju, ka tā kādu dienu aug uz koka, kas atrodas mana dzīvokļa priekšā. Ja jums nav tik paveicies, ka jūsu apkārtnē nejauši uzklupat S. Komunai, jūs vēlaties doties uz mežu, lai meklētu "kronšteina" sēnes, kas aug uz slimiem cietkoksnes kokiem (koki, kas izskatās kā nedara) pārāk labi) vai kritušiem kokiem. S. Commune ir viena no visbiežāk sastopamajām sēnēm visā pasaulē, un to var atrast galvenokārt visur, kur ir cietkoksne, kur augt.

Vietnē Mushroomobserver.org ir sniegts lielisks detalizēts apraksts par to, kur un kad jūs, iespējams, atradīsit S. Commune, kā arī to, kā to identificēt un kā izvairīties no līdzīga izskata, kas varētu izraisīt kļūdainu identificēšanu:

IDENTIFIKĀCIJA: Schizophyllum komūnu ir viegli atpazīt pēc šķeltām žaunām, blīviem matiem un vēdekļveida vāciņa. Vāciņš ir 1-4,5 cm plats un parasti ir čaumalas vai ventilatora formas ar pelēku vai bālganu virsmu. Basidiosporas ir 5-7,5 × 2 -3 mikrometri. Līdzīga sēne, kas pazīstama kā “Crimped Gill” Plicaturopsis crispa, nav tik plaši izplatīta.

PRASĪBAS: Schizophyllum komūna aug uz cietkoksnes, izmantojot fermentus, lai noārdītu lignīnu, un izraisa “balto puvi”. Tātad tas ir sastopams lielākajā daļā kokaugu. To var atrast visu gadu, pateicoties tā spējai izžūt, rehidrēt labākos apstākļos un pēc tam turpināt sporulēt.

Šī sēne var būt parazitāra uz maza diametra kokiem, kas ir pakļauti citu faktoru, piemēram, sausuma, stresam.

SKATIES LĪDZI: Plicaturopsis crispa jeb “gofrētā žauna” ir līdzīga Split Gill. Tam ir arī čaumalas/ventilatora formas augļu ķermenis. Tomēr vāciņš ir sarkanbrūns vai dzeltenbrūns, un apakšdaļa ir ļoti atšķirīga. Tam ir gofrētas vēnas, piemēram, žaunas, kas daudz atšķiras no Schizophyllum komūnas sadalītajām žaunām. Gofrētā žauna ir retāk sastopama, bet atrodama atšķirīga."

2. solis: izveidojiet barojošās agara plāksnes, lai S. Commune varētu augt

Lai izolētu atrasto S. Commune kultūru, jums vajadzēs dažus Petri traukus, kas pildīti ar sēņu barību. Iesala ekstrakts Agars ir vienkārši pagatavojams ēdiens S. Commune jeb “barības vielas”, ko var pagatavot no viegli pieejamām sastāvdaļām. Tas ir arī labs pārtikas avots, ko izmantot, veicot fermentatīvās pārbaudes eksperimentus ar S. Commune un citām baltās vai brūnās puves sēnītēm ~ ~ šis process tiks apskatīts citā pamācībā.

SĀKUMA PIEZĪME: Ja jums bija grūtības atrast S. Commune, tajā pašā ģimenē ir daudzas citas sēnes, kuras var kultivēt, izmantojot tos pašus procesus, un tās ir tikpat labas, ja ne labākas, noārdot endokrīno sistēmu traucējošos piesārņotājus. Turcijas aste (Trametes Versicolor) ir konstatēta daudzos pētījumos, kuros simtiem baltās un brūnās puves sēņu tika aplūkoti kā vislielākie "lignocelulozes" enzīmu ražotāji, kas degradē naftas ķīmisko piesārņojumu. Arī austeru sēnes šajā ziņā ir ļoti labas.

Es veicu savu mikrobioloģisko darbu kopienas bioloģijas laboratorijā ar nosaukumu BUGSS (Baltimoras pazemes zinātnes telpa), kur man ir pieejami stikla trauki, digitālie svari, graduēti cilindri, autoklāvs (mediju sterilizēšanai karstumā un spiedienā) utt. Šādās laboratorijās ir Pēdējā desmitgadē parādījās visā pasaulē, tāpēc, iespējams, vēlēsities pārbaudīt šo sarakstu, lai redzētu, vai kāds no jums ir tuvumā. Ja jūsu reģionā nav šādas lieliskas kopienas laboratorijas, jums būs jāiegulda dažās šī procesa pamatiekārtās, piemēram:

1 ~ Digitālā skala sastāvdaļu precīzai mērīšanai

2 ~ spiediena katls, lai sterilizētu materiālus ar karstumu un tvaiku

3 ~ Petri trauciņi, tos var iegādāties tiešsaistē diezgan lēti, derēs atkārtoti lietojams stikls vai vienreiz lietojama plastmasa, bet atkārtoti lietojama vienmēr ir labāka:)

4 ~ Daži stikla trauki sastāvdaļu sajaukšanai, sterilizēšanai un uzglabāšanai.

Ja nevēlaties ieguldīt šajā aprīkojumā, jūs varat atrast iepriekš ielietas iesala ekstrakta agara plāksnes, ko iegādāties tādās vietnēs kā Amazon-ilgtermiņā tas būs tikai dārgāk, ja plānojat turpināt veikt mikrobioloģisko darbu.

Jau tagad ir daudz lielisku ceļvežu un youtube videoklipu par to, kā mājās pagatavot Petri ēdienus ar barības vielām. Tā vietā, lai iedziļinātos šajā jautājumā, es tikai izveidošu saiti uz pāris un sniegšu recepti 2% iesala ekstrakta agaram, kas ir jūsu izmantotais barības līdzeklis.

Freshcap sēnes: rokasgrāmata par to, kā mājās pagatavot agara plāksnes sēņu audzēšanai

Mikovebs: Darba sākšana ar sēņu audzēšanu

Iesala ekstrakta agara tehniskā datu lapa

2% iesala ekstrakta agars (MEA) ~ ~ 1 litra recepte:

20 g iesala ekstrakts (parasts alus pagatavošanas līdzeklis, var iegādāties tiešsaistē)

15 g agara (cietinātājs - to bieži izmanto, lai pagatavotu ēdienu, tāpēc to var iegādāties tiešsaistē vai dažos pārtikas preču veikalos)

1 litrs H20 (es parasti izmantoju reversās osmozes ūdeni, ko var iegādāties lielākajā daļā pārtikas preču veikalu galonu kannās)

Šo recepti var viegli mainīt, ja vēlaties pagatavot mazākus daudzumus. Piemēram, es bieži vien gatavoju tikai 250 ml vienlaikus, tāpēc es izmantoju tikai 5 gramus iesala ekstrakta, 3,75 gramus agara un 250 ml ūdens.

3. solis: inokulējiet Petri trauku ar sēnēm

Redzēto sēni sauc par “augļķermeni”, tā ir tikai neliela organisma daļa. Lielākā daļa ķermeņa ir paslēpta kokā (vai zemē), patērējot koksni. Šo sēnes daļu sauc par micēliju. Lai kultivētu Schizophyllum Commune balto pavedienu, taustekulāro, sakneņveida, micēlija ķermeni uz Petri trauciņa, ņemiet kāta paraugu, sterilizējiet un novietojiet uz MEA plāksnēm. Mikēlijs pieaugs no sterilizētā sēņu kāta serdes parauga un kolonizēs Petri trauku, izskatoties kā balts kokvilnas paklājs.

Jums būs nepieciešams:

• Iesala ekstrakta agara (MEA) plāksnes, kuras sagatavojāt iepriekšējā solī
• 70% izopropilspirta (berzes spirts) un aerosola pudele
• Papīra dvieļi
• Skalpelis vai vienkārši nerūsējošā tērauda skuveklis - kastes griezējs derēs
• metāla pincetes
• cimdi
• Liesma - instrumentu sterilizēšanai izmantoju alkohola lampu, NonDisjunction ir lieliska pamācība, kā to šeit izveidot.
• Sterila virsma griešanai (es tikko izmantoju sterilu Petri trauciņu)
• Parafilm, parafīna plēve, ko izmanto Petri trauku aizzīmogošanai - varat arī izmantot maskēšanas lenti, ja jums tāda nav

STERILĀ TEHNIKA:

Galvenais, kas jāpatur prātā, mēģinot izmantot sterilu tehniku, ir tas, ka baktērijas un sporas nepārtraukti nokrīt gaisā, tāpēc jūs vēlaties pēc iespējas vairāk aizsegt savus Petri traukus. Paceļot vākus, lai ieliet materiālus, vai veicot potēšanu, vienmēr vislabāk ir turēt vāku tieši virs trauka, ļaujot piekļūt iekšpusei horizontāli, bet turot vāku virs trauka, lai novērstu baktēriju iekļūšanu. Otrkārt, ir milzīgs cilvēku, baktēriju, sēnīšu un citu organismu konglomerāts - lai gan jūs to neredzat, jūs ieskauj blīvs mikrobu mākonis, kas izkliedējas no jūsu ķermeņa. Tā vietā, lai vienkārši sēdētu uz ādas virsmas, jūsu mikrobioms stiepjas gaisā ~ ~ sooooooo, nekad neplātiet rokas pār Petri trauku un neliecieties virs atvērtā trauka, lai tajā ieskatītos. Un valkājiet cimdus, ja tev tie ir;)

IESTATIET SEMI-STERILO DARBA TELPU

Izvēlieties neporainu darba virsmu, kurā nav gružu un atkritumu. Izsmidziniet vietu ar 70% izopropilspirta šķīdumu un noslaukiet to ar papīra dvieli. Novietojiet liesmu darba zonas centrā un iededziet to. Jūs vēlaties strādāt pēc iespējas tuvāk liesmai, jo tas rada nelielu sterilu lauku ap to. Novietojiet MEA plāksnes vienā pusē un sēņu paraugu uz sterila griešanas virsmas otrā pusē. Parasti kā sterilu griešanas virsmu izmantoju sterilu Petri trauciņu, kā arī instrumentu balstu. Nelielā glāzē ielejiet nedaudz izopropilspirta - jūs to izmantosit, lai darba laikā sterilizētu asmeni un pinceti.

*¡~ INOCULATE ~!*

Pirms kaut ko darīt, sterilizējiet asmeni un pinceti, iegremdējot tos izopropilalkā un pēc tam nedaudz turot tos virs liesmas. Pēc sterilizācijas novietojiet tos uz savas sterilās griešanas virsmas, ja tos noliekat. Izmantojot pinceti, turiet sēņu kātu nekustīgu un nogrieziet gabalu no tā gala. Paņemiet šo gabalu un nogrieziet visas malas tā, lai galu galā būtu neliels sēņu kāta serdes kubs ar visām ārējām virsmām. Tas palīdz atbrīvoties no visiem pārējiem sēnē dzīvojošajiem mikrobiem, lai tie nepiesārņotu jūsu kultūru. Pēc tam apmēram 30 sekundes iegremdējiet kāta serdi izopropilā, izvelciet un ļaujiet nožūt sterilā liesmas laukā (neizmantojiet liesmu, lai to nožāvētu, tas nogalinās sēni). Gaidot, kamēr kāta kodols izžūst, vēlreiz pinceti sterilizējiet ar liesmu. Pēc tam vienkārši paceliet vienas MEA plāksnes vāku tik daudz, lai iebīdītu pinceti no sāniem, un izmantojiet sterilizētās pincetes, lai novietotu kāta serdi plāksnes centrā. Aizveriet plāksni ar parafilmu, un nākamo nedēļu laikā jums vajadzētu redzēt S. Commune micēliju, kas kolonizē plāksni.

Strādājot ar savvaļas paraugiem, es parasti izgatavoju vairākas plāksnes, lai, ja es tomēr tiktu inficēts, man, visticamāk, būtu vismaz viena tīra kultūra.